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磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)生化盒

型 號

產品時間2024-11-21

所屬分類糖異生系列

報價300

產品描述:磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)生化檢測試劑盒PEPCK(EC 4.1.1.32)廣泛存在于動物、植物、微生物和細胞中,催化草酰乙酸轉化為磷酸烯醇式丙酮酸,是調節(jié)糖異生途徑的關鍵酶。

產品概述

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產品名稱

規(guī)格

貨號

磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)生化檢測試劑盒

100/96 50/48   

EY-01S1373

 

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測定意義:

PEPCKEC 4.1.1.32)廣泛存在于動物、植物、微生物和細胞中,催化草酰乙酸轉化為磷酸烯醇式丙酮酸,是調節(jié)糖異生途徑的關鍵酶。

測定原理:

PEPCK催化草酰乙酸生成磷酸烯醇式丙酮酸和CO2,丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶進一步依次催化NADH氧化生成NAD+,在340nm下測定NADH下降速率,即可反映PEPCK活性。

需自備的儀器和用品:

分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

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試劑一:液體×1瓶,室溫保存。

試劑二:液體×1瓶,4℃保存。              

試劑三:粉劑×2瓶,-20℃保存。臨用前加入22mL試劑二,現配現用。

試劑四:液體×1支,4℃保存。

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1、組織:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿。16000g,4℃離心20min,取上清置冰上待測。

2、細菌、真菌:按照細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);16000g, 4℃離心20min,取上清液置冰上待測。

3、血清等液體:直接測定。

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(1)按照蛋白濃度計算

活性單位定義:25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。

ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(Cpr×V樣)÷T

=1608×△÷Cpr

(2)按照樣本質量計算

活性單位定義:25℃中每克組織每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。

ADH (nmol/min/g鮮重) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=1608×△A÷W

(3)按細胞數量計算

活性單位定義:25℃中每104個細胞每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。

ADH (nmol/min/104cell) =(△A÷ε÷d×V反總×109)÷(細胞數量×V樣÷V樣總)÷T

=1608×△A ÷細胞數量13.png

(4)按液體體積計算

活性單位定義:25℃中每毫升血清每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。

ADH (nmol/min/mL) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷V樣÷T

=1608×△A

ε:NADH摩爾消光系數,6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光徑,1 cm;V反總:反應體系總體積,1000μL=0.001 L;Cpr:上清液蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;V樣:加入反應體系中上清液體積,100μL=0.1 mL;T:反應時間,1min。

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